Nanobody (VHH) Library Generation

ナノボディライブラリ構築

ナノボディライブラリ構築

ナノボディ(nanobody)とは、目標抗原に結合し、重鎖のみから成る抗体の可変領域です。単鎖抗体、単一ドメイン抗体などと呼ばれることもあります。ナノボディは通常の抗体と同じの親和性を有し、普通の抗体より安定性が高いです。次世代治療用抗体技術として注目されています。

BioIntronは、当社のファージディスプレイ技術及び高い抗体発現技術に基づいて、ナノボディのトップサプライヤーとして、多くのお客様がご愛用いただきました。

特長

アルパカを再利用しない
アルパカを再利用しない

20以上のユーニーク配列の提供を保証する
20以上のユーニーク配列の提供を保証する

高い多様性とラージカパスィティ
高い多様性とラージカパスィティ

ナノボディライブラリ構築サービスワークフロー


ナノボディライブラリ構築 Working Flowchart

ナノボディ(VHH)ライブラリ構築サービス詳細

ステップサービス仕様作業時間作業料金納品
Phage I: 抗原調製/抗原検証BioIntronで抗原合成/お客様からのご郵送

抗原準備 2週間

抗原検証 2~3日

TBD

精製されたタンパク質抗原1㎎

お客様からご提供の場合:4㎎抗原 (SDS-PAGE> 95%、endotoxin <1EU / mg)

Phage II: アルパカの免疫とPBMCの単離/保存

5mlの免疫前血清を回収する

2回目、3回目、4回目の免疫後のELISA力価を測定し、報告する

2回目、3回目、4回目の免疫後の50ml PMBCが回収され、Trizolで保存する

8-11週間950,000円/匹

抗原の原因でアルパカが死亡する場合、600,000円のセットアップ料金を請求する

2回目、3回目、4回目のELISA結果により、お客様が指定することができる

Phage Ⅲ: VHH ファージライブラリーの構築

RNA抽出とcDNA調製

VHH増幅

ライブラリの多様性とカパスィティの測定

クローン数のカウントとシーケンスにより、ライブラリのカパスィティを測定する

3-5週間¥2,400,000

VHHカパスィティが 109に達する

Phage Ⅳ: ライブラリスクリーニング及びパンニング

3回以上のパンニング

ELISAの検査およびポジティブクローンのスクリーニング(200クローン以上)

ポジティブクローンシーケンシングおよびシーケンシング結果解析

10-12週間¥2,400,000

20以上のユーニーク配列の提供を保証する

VHH-Fc抗体産生(オプション)

遺伝子合成、サブクローニング、プラスミド調製

一過性の発現と精製

QC解析

2週間48,000円/VHH精製された抗体(SDS-PAGE >95%, endotoxin<1EU/mg)
アフィニティーランキング(オプション)Biacore T200を利用してアフィニティー測定1-2週間144,000円/サンプル full KD
Note: If the ELISA titer after 4th immunization is <1:5,000, we will suggest to terminate the project and charge the fee for phase I and phase II.
**郵送時間が通常に4-7日になります。

Case Study: Unique VHHs screening from alpaca immunization

Project description: A biotech client provide two Antigens, H (human origin) and M (mouse origin) in order to obtain VHH recognized both M and H.

VHH library screening result:


68 Unique sequences


68 Unique sequences



33 Unique CDR3


33 Unique CDR3


Alpaca A (3rd immunization): 293 double positive clone, 38 unique sequence and 9 unique CDR 3.

Alpaca B (3rd&4th immunization): 200 double positive clones, 40 unique sequence and 27 unique CDR 3.

Totally, obtain 68 unique sequences and 33 unique CDR3 from Alpaca A and Alpaca B.

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